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编号:12784081
鼻息肉组织Th细胞分化诱导因子IL—12和IL—4的表达及临床意义(2)
http://www.100md.com 2015年10月15日 中国医药科学 2015年第20期
     1.2 标本采集与处理

    全部新鲜标本均置入胎牛血清含量为10%的DMEM培养液里,使用磷酸缓冲液进行反复清洗。将磷酸缓冲液中的标本充分剪碎后,放置在100目尼龙网中轻轻摩擦,并使用260目的镍锌网进行过滤,重悬后置于离心管内,离心半径为8cm,以1200r/min速度进行,操作5min,并使用清洗磷酸缓冲液清洗2~3次备用[3-4]。

    取经手术切除的实验组患者的鼻息肉组织和对照组患者的中鼻甲组织作为观察标本,利用生理盐水将标本洗净和擦干后,置于零下80℃环境中低温保存;在检测前待标本经常温熔化恢复常态后,立即使用天平称取1g,并在存放冰水的平皿中剪成碎片,添加1mL的磷酸缓冲溶液后,在玻璃匀浆器中进行充分研磨,离心半径为8cm,以3000r/min速度进行,操作20min,待浆液磨匀后取清液以备检测。

    1.3 观察和测定方法

    (1)Th1、Th2百分率:集齐全部的标本悬液之后,可开始刺激、培养,进行细胞膜打孔,荧光抗体进行染色标记,全部完成后再上机检测。采用流式细胞仪对Th1、Th2细胞计数统计CD4+细胞内产生的IFN-γ是Th1细胞,产生的IL-4是Th2细胞,并用软件CELL Quest作分析。

    (2)IL-12与IL-4:使用ELISA对白细胞介素IL-4 、IL-12进行测定,实验按照试剂盒的说明步骤操作 ......
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